Phalloidin Conjugates 鬼筆環(huán)肽偶聯(lián)物背景介紹：

　　肌動(dòng)蛋白(Actin)是一種分子量~42kDa的細(xì)胞骨架蛋白，幾乎存在所有真核細(xì)胞中。也是一種zui高度保守蛋白，藻類和植物之間序列差異不超過(guò)20%。肌動(dòng)蛋白是細(xì)胞中兩種纖維的單體亞基：微絲(Microfilaments)，又稱肌動(dòng)蛋白絲(Actin filaments)，細(xì)胞骨架三種主要成分之一;細(xì)肌絲(Thin filaments)，肌肉細(xì)胞收縮絲的一部分。因此，肌動(dòng)蛋白參與許多重要的細(xì)胞生理過(guò)程，包括肌肉收縮、細(xì)胞運(yùn)動(dòng)、細(xì)胞分化和胞質(zhì)分列、囊泡和細(xì)胞器運(yùn)動(dòng)、細(xì)胞信號(hào)，以及細(xì)胞連接和細(xì)胞形狀的搭建和維持。

　　單體形式存在的稱為球形肌動(dòng)蛋白(Globular actin，G-actin)，具有緊密的結(jié)合位點(diǎn)介導(dǎo)其與另外兩個(gè)單體肌動(dòng)蛋白進(jìn)行頭-尾相互作用，從而使得單體激動(dòng)蛋白聚合形成纖維(Filamentous actin，F(xiàn)-actin)【見圖1.肌動(dòng)蛋白絲的組裝和結(jié)構(gòu)】。

　　圖1. 肌動(dòng)蛋白絲的組裝和結(jié)構(gòu)。(A)G-actin聚合形成F-actin。*步生成二聚體和三聚體，然后通過(guò)逐步添加單體蛋白到兩端來(lái)生長(zhǎng)。(B)G-actin的結(jié)構(gòu)。

　　鬼筆環(huán)肽(Phalloidin)，又稱鬼筆鵝膏素，是從毒蘑菇鬼筆鵝膏(Amanita phalloides)中分離到的一種七肽毒素，以*的親和力和特異性結(jié)合肌動(dòng)蛋白絲F-actin(聚合形式的肌動(dòng)蛋白)，不會(huì)結(jié)合單體肌動(dòng)蛋白(G-actin)。不像一些肌動(dòng)蛋白抗體，同時(shí)識(shí)別單體和聚合形式的肌動(dòng)蛋白。

　　◎Phalloidin Conjugates 鬼筆環(huán)肽偶聯(lián)物 產(chǎn)品應(yīng)用：

　　1)用來(lái)標(biāo)記、鑒定和定量肌動(dòng)蛋白絲(F-actin);

　　2)體外穩(wěn)定肌動(dòng)蛋白絲(F-actin);

　　3)體外觀察固定或活細(xì)胞中肌動(dòng)蛋白絲(F-actin)的定位、分布，以及觀測(cè)單一的F-actin;

　　4)高分辨率下研究肌動(dòng)蛋白網(wǎng)絡(luò)

　　◎ 產(chǎn)品特點(diǎn)：

　　1)應(yīng)用范圍廣：甲醛固定和透化處理的組織切片、培養(yǎng)細(xì)胞，以及無(wú)細(xì)胞實(shí)驗(yàn)體系;無(wú)物種差異性;

　　2)親和力高、穩(wěn)定性強(qiáng)：解離常數(shù)Kd約3×10–8M;

　　3)特異性強(qiáng)：特異結(jié)合F-actin，不會(huì)結(jié)合G-actin，背景明顯低于Actin抗體染色，幾乎無(wú)特異性染色，且不受物種限制。

　　4)毒性?。汗砉P環(huán)肽及衍生物分子量小，對(duì)F-actin影響小。經(jīng)標(biāo)記后的F-actin仍維持許多未標(biāo)記actin的功能特征包括與肌球蛋白的相互作用。

　　5)靈敏度高：nM濃度即可達(dá)到染色需求;

　　6)適合多重標(biāo)記實(shí)驗(yàn)：提供多種鬼筆環(huán)肽熒光偶聯(lián)物，選擇范圍廣，能實(shí)現(xiàn)多重標(biāo)記;

　　◎ 染色流程【圖2】：

　　◎ 染色示例：

　　圖3. Jasplakinolide (Jas)或Cytochalasin D (Cyto D)對(duì)HSC-T6細(xì)胞肌動(dòng)蛋白骨架重組的生理效應(yīng)。HSC-T6細(xì)胞分別經(jīng)DMSO (vehicle control)，Jas (100 nM) or Cyto D (1 μM)處理1h，之后4%多聚甲醛固定15 min。之后phalloidin-FITC(MX4403)染色肌動(dòng)蛋白絲，細(xì)胞核用DAPI(MX4207)復(fù)染。熒光顯微鏡下成像檢測(cè)。

　　圖4. HeLa細(xì)胞經(jīng)iFluor™ 488 Phalloidin染色后熒光顯微　　鏡檢測(cè)圖(FITC濾片設(shè)置-綠色)。

　　圖5. HeLa細(xì)胞經(jīng)iFluor™ 647 Phalloidin染色后熒光顯微鏡檢　測(cè)圖(Cy5濾片設(shè)置-紅色)。

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　　【注】：iFluor™系列的熒光光譜同Alexa Fluor™系列，熒光穩(wěn)定性和熒光強(qiáng)度幾乎與Alexa Fluor™*，是傳統(tǒng)熒光探針FITC, TRITC, 5-TAMRA等的升級(jí)品。

　　◎ 相關(guān)產(chǎn)品：【見我司整理的細(xì)胞松弛素Cytochalasin產(chǎn)品專題】。